可能的原因

解决方案

质粒DNA、siRNA或转染试剂，在含有血清的培养基中稀释，或在血清存在的情况下形成复合物。

使用无血清培养基稀释质粒DNA、siRNA和转染试剂。

稀释时间或复合培养期太短。

我们建议将DNA和转染试剂分别稀释并孵育5分钟。将稀释的试剂一起加入并孵育20分钟以获得最佳性能。

转染的质粒DNA或siRNA降解或质量较差。

确保用于转染的质粒DNA或siRNA具有高质量。

培养基中存在抑制剂。.

不要在生长培养基或用于制备DNA的培养基：转染试剂复合物中使用抗生素，EDTA，柠檬酸盐，磷酸盐，RPMI，硫酸软骨素，透明质酸，硫酸葡聚糖或其他硫酸化蛋白多糖。

用于测定效率或表达的分析中存在问题。

使用报告基因来测量转染效率。

细胞无法识别载体上的启动子/增强子。

验证载体构建体上的启动子/增强子是否与靶细胞类型兼容。

随着时间的推移，细胞发生了变化，或者分裂条件发生了变化。

如果转染性能突然下降，可能与细胞有关。 我们建议以一致的时间表分裂和电镀细胞，并保持细胞密度不会太稀疏或过密。 过度分裂也会降低转染性能。

可能的原因

解决方案

在转染期间，生长培养基中添加了抗菌剂。

不要在生长培养基中使用抗生素，如氯喹、青霉素或链霉素，因为在转染过程中，细胞更容易被抗生素渗透，可能会产生毒性。

转染试剂储存不当。

我们建议将转染试剂储存在4°C。冷冻或在室温下储存，可能会降低试剂的活性。

复合物未在生长培养基中未充分混匀。

在向培养基中加入转染复合物后，确保板或孔完全混合。

随着时间的推移，细胞发生了变化，或分裂条件发生了变化。

如果转染性能突然下降，可能与细胞有关。 我们建议以一致的时间表分裂和电镀细胞，并保持细胞密度不会太稀疏或过密。 过度分裂也会降低转染性能。

阳离子脂质试剂被氧化。

不要过度涡旋或搅动阳离子脂质试剂，这可能形成阳离子脂质试剂过氧化物。

选择性抗生素加入过于迅速。

当建立稳定的细胞系时，允许细胞在加入选择性抗生素之前至少72小时表达抗性基因。

可能的原因

解决方案

随着时间的推移，细胞发生了变化，或者分裂条件发生了变化。

如果转染性能突然下降，可能与细胞有关。 我们建议以一致的时间表分裂和电镀细胞，并保持细胞密度不会太稀疏或过密。 过度分裂也会降低转染性能。

转染在不同细胞汇合或不同DNA与转染试剂的比例下进行。

转染性能的可重复性取决于细胞分裂、电镀和转染中采用一致的方案(相同的DNA与转染试剂比率)的一致性。不同的DNA制剂或培养基的改变也可能改变转染性能。