"原代细胞 "和 "细胞系 "之间有什么区别？

原代细胞是直接从活体组织中提取并在体外建立生长的细胞。原代细胞的寿命是有限的，并被广泛使用，因为它们保留了许多在体内看到的标志物。来自不同物种的原代细胞使你能够突出人类和临床前测试物种之间的潜在差异。在体内研究之前，使用原代细胞可以细化剂量，减少临床前毒理学所需的动物数量。人类原代细胞可用于确定从动物模型推断人类数据的准确性。

细胞系是一个经过基因改造的细胞群，导致无限的生长潜力。在实践中，细胞系可以通过非常多的传代培养，尽管在非常高的传代数下可能会发生一些进一步的基因型和表型变化。

一般来说，细胞系缺乏许多在体内看到的标志物，也显示出与原生细胞非常不同的标志物特征。

收到冻存的细胞后应该如何处理？

收到包裹后，应立即将低温保存的细胞从干冰运输容器中转移到液氮储存罐中，以防止细胞解冻。

在不确定的情况下，如果收到时包装中没有干冰，应立即解冻并使用细胞。

不要在-20°C或-80°C下储存细胞，因为这将对细胞造成不可逆的损害。

如何从冷冻保存的细胞建立培养？

注：详细说明请参考细胞产品说明书。

1) 从液氮中取出一小瓶细胞，注意保护手和眼睛。

2) 松开小瓶上的盖子，旋转1/4圈10秒钟，以释放可能困在螺纹中的任何液氮，然后重新拧紧盖子。

3) 将冷冻的小瓶放在37℃的水浴中。轻轻握住并旋转小瓶，直到内容物完全解冻。

4) 迅速从水浴中取出小瓶，用70%的乙醇擦拭，并将其转移到无菌区。

5) 小心地取下瓶盖，不要触及内部螺纹。轻轻地重新悬浮内容物。

6) 从小瓶中取20μL，用20μL胰蓝溶液稀释细胞悬液。

7) 使用验血仪确定每毫升活细胞的数量。

8) 将小瓶中的内容物（1 mL）稀释到产品说明书中推荐的浓度。

9) 在每个25 cm²的培养瓶中加入5 mL细胞悬液，或在每个75 cm²的培养瓶中加入15 mL细胞悬液。轻轻摇晃容器，使细胞均匀分布。

10) 将培养瓶放回孵化器（37°C，5% CO₂/95%空气）。

11) 为了获得最佳效果，在培养开始后的至少24小时内不要打扰培养。第二天刷新培养基，去除残留的DMSO和未附着的细胞。

应该多久更换一次原代细胞的细胞培养基？

将冷冻保存的细胞解冻并铺板后，应在 24 小时或过夜后进行第一次培养基更换，以便去除残留的 DMSO 和任何死细胞。通常，培养基应每 2-3 天更换一次，具体取决于细胞的汇合度，直到细胞准备好传代。

原代细胞可以传多少代？

我们使用术语“种群倍增”而不是“传代”来描述细胞的生长潜力。种群倍增是培养中细胞总数的两倍。术语传代次数是指从培养容器中取出细胞群并进行传代（传代）过程的次数。由于不同研究人员在传代培养时的分流比不同，因此很难预测特定原代细胞可以获得多少次传代。我们的原代细胞可保证细胞产品表上指定数量的种群倍增。

可以扩大原代细胞并重新冷冻它们吗？

我们不建议我们的客户重新冷冻原代细胞。冷冻保存过程可能会导致细胞生长性能的改变。

FBS中有明显的絮凝物——这正常吗？

FBS 中絮凝剂的存在是由于脂蛋白沉淀——这些都是正常的，对细胞无害。客户可以在 400g 下短暂离心并取上清液去除沉淀物，但这不是必需的。

需要在接种前将细胞从冷冻保存培养基中旋出吗？

我们不建议在铺板前将细胞从冷冻保存培养基中分离出来。离心可能对细胞有害，尤其是在使用不当的高速时。当您接种细胞时，DMSO 将在培养基中充分稀释。例如，如果您将 T-75 瓶中的整个冷冻管（1 毫升）细胞与 15 毫升培养基一起接种，则 DMSO 浓度将低于 0.67% (v/v)。因此，我们的产品说明包括包括以推荐的接种密度和培养基体积将细胞稀释到培养基中。