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全人源抗体技术浅谈:噬菌体抗体文库技术

2023-07-03 阅读(364)

噬菌体抗体库的分类 目前为止,研究者已经创建了大量的、各式各样的抗体库,大体可以分为四类:天然抗体库、免疫库、半合成抗体库以及人工合成库。天然抗体库来自未经特定抗原免疫的宿主。理论上从天然抗体库中可以筛选获得可特异结合任何抗原的抗体,但由于这些抗体基因缺乏体内重排与突变,因而获得高亲和力的抗体相对不易,所筛选的抗体需要进行进一步的亲和力成熟改造;并且筛选背景高,特定抗原的抗体丰度低。

与天然抗体库不同,通过采用来源于特定抗原有效免疫的之后的宿主B细胞构建的免疫抗体库,含有大量针对该特定抗原的抗体,筛选背景大大降低;并且这些抗体基因经过宿主体内的亲和力成熟过程,往往具有令人满意的亲和力。通常采用一个库容为1x10^6克隆的免疫抗体库,我们就可以获得抗体亲和力常数低于1x10^-9mol/L较高亲和力的抗体。虽然从一个经过良好抗原免疫构建的噬菌体抗体库中很容易获得适宜的全人源抗体,但由于人体不能随便免疫,制备全人源抗体时往往受到限制,这就要求任然需要建立库容量比较大的非免疫库,从中筛选目的全人源抗体。抗体库往往需要达到1x10^12克隆才能保证从中筛选到针对特定抗原表位的具有较高亲和力的全人源抗体。

此外基于天然抗体库的框架区以及CDR1和CDR2区,通过随机合成扩增CDR3区的DNA序列,能够获得半合成抗体库。由于CDR3是决定抗体特异性的最重要部位,在B细胞个体发生过程中,结构及序列的多样性变化最大,所以最常见是在CDR3引入随机突变,同时考虑长度的变化。但引入随机突变的时候,要兼顾CDR3侧翼的相对保守性,保留某些在抗原接触和结构形成中有重要作用的残基。人工合成库则是通过抗体基因信息设计并合成的纯人工合成库。