2021-08-15 阅读(1179)
1 可以优化基因吗?
卡梅德生物可以提供密码子优化的基因,旨在满足您的确切研究规范。在确认您的订单之前,这些序列始终可供您查看,并且通常包含在项目报价中。
2 密码子优化如何增强基因合成项目?
卡梅德生物的密码子优化工具可以针对多个关键参数进行优化,以稳定 DNA 片段并提高基因表达效率。参数包括但不限于:
--密码子使用偏差
--GC含量
-- mRNA二级结构
--自定义所需模式
--自定义非期望模式
--重复序列(直接重复、倒置重复和二元重复)
--限制性酶识别位点(删除或插入)
请注意,卡梅德生物不能保证蛋白质的最终表达。
3 亚克隆和PCR克隆的区别?
这两种服务都提供从现有的模板质粒克隆插入物到不同的目的质粒。对于我们的亚克隆服务,要克隆的插入物的两侧已经有了用于克隆的限制性位点。这项服务是针对简单的限制/连接。PCR克隆服务是在克隆前需要额外的PCR步骤时提供的。例如,这可能是添加正确的限制性位点的需要。
4 基因重悬方案
对于重悬,我们建议采用以下方法。
--短暂离心试管以确保内容物在试管的底部
--将样品重悬于适合你需要的体积中。
--例如,20-50 µL用于~0.25至~0.1 µg/µL的无菌高纯度水
--重悬溶液取决于下游的应用--TE可能会干扰各种酶的操作
--涡旋一下,让DNA管在冰上放置2-10分钟,然后再涡旋一下
引物修饰常用染料的参数
染料 |
最大吸收波长(nm) |
荧光发射最大波长 (nm) |
摩尔消光系数 |
颜色 |
FAM |
495 |
520 |
83,000 |
绿色的 |
TET |
521 |
536 |
73,000 |
橙色的 |
JOE |
520 |
548 |
71,000 |
粉色的 |
HEX |
520 |
548 |
71,000 |
粉色的 |
TAMRA |
544 |
576 |
90,000 |
玫瑰 |
Cy3 |
550 |
570 |
150,000 |
红色的 |
ROX |
576 |
601 |
82,000 |
红色的 |
TexasRed |
583 |
603 |
107,000 |
红色的 |
Cy5 |
650 |
670 |
250,000 |
紫色 |
5 寡核苷酸如何量化?
寡核苷酸最常通过测量其在 260 nm 处的 UV 吸光度来定量。以 33 µg/ml 的浓度溶解在中性水溶液中的单链寡核苷酸在 260 nm 处的吸光度约为 1.0 AU 光密度 (OD) 单位定义为吸光度(在 1 cm 处的 260 nm 处)比色皿)乘以样品体积(以毫升为单位),因此 1 OD 单位大约是 33 µg ssDNA。
6 什么是合成规模和收率?
合成规模是指合成介质上游离 3'-末端的起始量,通常以 nmol 为单位,例如 25 nmol、50 nmol 等。 产量是指在所有合成和纯化步骤完成后回收的最终产物的量完全的。产量通常以 OD 来衡量,例如 3 OD、5OD 等。
7 得到的寡核苷酸数量是否与量表中指示的数量相同?
不。客户订购的合成规模表示开始合成寡核苷酸的 3' 碱基数量。由于寡核苷酸合成(或任何化学反应)从来都不是 100% 有效的,因此合成和纯化步骤后回收的最终产物量(产量)将始终小于用于合成的起始量。产量取决于寡核苷酸的大小、偶联效率和碱基组成。修饰、二级结构和纯化服务进一步影响最终产量。卡梅德生物提供基于所有这些因素的保证产量,这些因素定义了您收到的最低寡核苷酸数量。通常情况下,合成产生的材料比保证的最低限度多,但是,如果您的实验需要的材料超过最低限度,那么我们强烈建议您使用更高的合成规模。