一、有哪些常见的酵母表达载体？

答：由于原核生物和真核生物存在糖基化、酰基化等翻译后修饰反应机制的差异，真核基因的原核表达难以获得有活性的蛋白，酵母成为了真核表达的首选系统。那么在进行酵母表达前，我们首先需要了解酵母表达载体。

酵母表达载体多数从pUC57基本骨架衍生而来，常见的有pPIC9K、pPIC3.5K，还有pGAPZ A，pGAPZ B，pGAPZ C，都为AOX1启动子，均为毕赤酵母分泌表达载体。pPIC9K比pPIC3.5K多了一个alpha分泌信号肽，相应的载体大小就大。需要注意的是pPIC3.5K插入基因必需包含起始密码子ATG。

酵母表达载体多为穿梭载体，既可以在大肠杆菌中繁殖，获得足够的载体DNA进行体外操作，又可以在酵母中复制、表达和选择。它的宿主菌为：GS115（缺陷型），X33（野生型）。载体pPIC9K、pPIC3.5K对应的宿主菌是GS115，pGAP系列对应的宿主菌是野生型X33。

二、酵母表达载体对应的酵母表达系统有哪些？

三、如何选择合适的酵母表达载体？

酵母表达产物有胞内表达和分泌到胞外表达两种方式，这取决于表达载体的选择和构建是否带有信号肽，可根据基因表达的目的选择合适的酵母蛋白表达载体。

胞内表达载体，常见的载体是pGAP系列和pPIC3.5K。胞内表达载体的优势是将目的基因表达在胞内，可避免酵母的糖基化，适合于通常在胞浆表达或不含二硫键的非糖基化蛋白，相对于胞外分泌表达水平高但纯化相对复杂。

胞外表达载体，常见的是载体pPIC9K。胞外表达载体的优势在于为分泌到胞外的表达载体。选择这种载体的优势在于酵母本身分泌的外源蛋白很少，将外源蛋白分泌到胞外，有利于目的蛋白的纯化和积累。

如果蛋白本身就是分泌型蛋白，可直接选择毕赤酵母表达的外源基因位于酵母染色体上，通过把构建的质粒/载体线性化（主要采用酶切），通过同源重组的方式整合到启动子AOX的下游，一般是插入到5’AOX启动子和转录终止子信号之间的单克隆位点。