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重组蛋白表达FAQs

2018-12-25 阅读(611)

Q1:卡梅德可提供哪些类型的表达系统和蛋白质服务?

A1目前我们提供大肠杆菌、哺乳动物、酵母和杆状病毒(昆虫)表达系统。我们提供广泛的生产和纯化服务,包括标签去除,冻干,内毒素去除,发酵,N-末端测序和QC测试。我们的基因合成服务还允许我们合成以及亚克隆您的基因,使其为蛋白质生产做好准备。

 

Q2:在何种情况下选用杆状病毒(昆虫)表达系统?

A2杆状病毒(昆虫)表达是产生成熟、折叠和加工的重组蛋白的理想方法。与大肠杆菌不同,昆虫细胞能够结合翻译后修饰,它们也特别适合表达分泌蛋白。

 

Q3:在何种情况下选用哺乳动物表达系统?

A3在哺乳动物细胞中产生的蛋白质具有包含所表达的蛋白质的全部翻译后修饰(例如,适当的折叠、糖基化、磷酸化等)的优点。然而,哺乳动物的表达水平往往较低,因此成本较高,实现大量的蛋白质表达(>10mg)较困难。

 

Q4:需要提供什么,可以用自己构建好的质粒吗?

A4我们有密码子优化和基因合成服务,所以您只需提供您的基因/蛋白序列或NCBI条目即可,或者我们也可以使用您构建好的质粒。同时我们还需要您填写我们的蛋白质订单以便我们能理解您的具体需求。

 

Q5:会用亲和力标签纯化蛋白质吗?如果需要删除标签怎么办?

A5是的,我们将使用亲和标签(如HisGST)来纯化您的蛋白质。对于较难表达的蛋白质,我们也可以尝试其他标签(包括SUMOthioredoxin)来增加溶解度和表达。如果您有需要,我们可以切割标签,并提供无标签蛋白质作为最终产品交付。

 

Q6:对于生产何种类型的蛋白质有限制吗?

A6我们经验丰富的蛋白质团队将尽一切努力,几乎可以纯化所有的蛋白质。然而,为了获得最佳效果,我们建议靶蛋白分子量<100kDa,并且避免含有太多跨膜结构域。我们还建议去除任何可能附着在蛋白质N末端的信号肽,因为这些肽可以抑制重组系统中的蛋白质表达。

 

Q7:可以进行大量(毫克到克级)的蛋白质生产吗?

A7是的,对于大肠杆菌表达系统,我们能够一批生产大量的蛋白质(高达克级)。对于这些大规模的项目,我们通常从蛋白小试表达和纯化开始,如果小试结果满足客户需要,我们可以继续放大实验。根据客户需求以及蛋白表达情况,卡梅德生物的实验室可以生产毫克~克级的蛋白质,供科研和工业客户使用。