质粒抽提

a. 用四区划线分离法将少量菌种液涂布到Amp或Kana抗性的LB平板上；

b. 恒温培养箱培养；

c. 挑取单克隆，接入含有Kana或Amp抗性的LB液体培养基中；

d. 摇床培养箱培养；

e. 使用质粒大提试剂盒进行质粒大提（详情参照试剂盒说明书）；

f. 得到收集质粒DNA；

细胞转染

a. 转染前24h，使用新鲜完全培养基，接种细胞；

b. 转染当天，悬浮培养瓶中的细胞密度应在1×10⁶cells/ml，台盼蓝染色计数活细胞率应大于95%；

c. 在无菌离心管中加入适量完全培养基和质粒，涡旋混匀；

d. 将转染试剂加入质粒混合液中涡旋混匀，室温孵育；

e. 将孵育好的转染复合物滴加至悬浮培养瓶；

f. 在二氧化碳培养箱中，以适宜的温度、湿度、CO₂浓度进行培养，将悬浮细胞培养瓶置于摇床，以一定的转速悬浮培养；

g. 转染后4-5d，离心收集表达细胞和上清，用于蛋白纯化；

蛋白纯化

a. 装柱；

b. 平衡柱子：用平衡缓冲液，以一定的流速平衡柱子，直至纯化体系基线平衡；

c. 上样：基线平稳后，将配置好的纯化样品、以一定的流速过柱。样品进完后，再用平衡缓冲液洗出未结合组分，直至纯化体系基线平稳；

d. 洗脱：将所有洗脱峰分开收集至无菌离心管中；

e. 透析：在常规缓冲液中透析过夜；

鉴定分析

SDS-PAGE、WB