Q1：客户提供质粒的话，需要同时提供质粒的哪些信息？

A:客户需要提供以下信息：质粒的载体，目的序列，插入位点。最好可以提供包含目的基因的全载体序列。如果您对质粒的信息非常清楚，可以不做检测。如果不是很清楚，则建议先安排测序。

Q2：在哺乳动物系统中，常用的标签有哪些？

A:常用标签有Fc、His和Flag标签。添加Fc标签可以提高表达水平。His和Flag标签是小标签，可以用于亲和纯化。

Q3：CHO细胞与HEK293细胞有什么区别？

A：CHO细胞是中国仓鼠卵巢细胞，是目前表达外源蛋白较多较成功的细胞之一，CHO细胞是使用较广泛的宿主细胞，它可以用来生产重组蛋白和重组单克隆抗体。这种细胞有明确的基因组信息，在应对人类致病病毒时展现出合理的安全性。此外，CHO细胞表达系统重要的优势之一是容易获得转基因细胞。然而，由于糖基化模式与人类不尽相同，导致CHO细胞生产的重组蛋白在某种程度上仍然表现出免疫原性。

HEK293细胞，又叫人胚胎肾细胞293，是一个衍生自人胚胎肾细胞的细胞系。是哺乳蛋白表达常用的细胞之一，它的优势有：生长速度快、生长密度高、转染效率高、表达修饰后与人类蛋白的结构更相似。HEK293细胞由于其优秀的转染效率，主要用于瞬时表达。它的缺陷是在生长过程中，粘附强度相对较小，在实验过程中容易流失，从而影响实验结果。

Q4：瞬时转染与稳定转染有什么区别?

A：用于瞬时转染的质粒与用于稳定转染的质粒不同。瞬时转染的质粒不需要有抗性，而用于稳定转染的质粒必须有抗性，以方便后续的克隆筛选。此外，所用的培养基和实验试剂也不同。瞬时转染的操作比构建稳定细胞系的操作要简单。构建质粒后，通过细胞复苏、转染、细胞培养和蛋白纯化就可以获得目标蛋白。要构建稳定的细胞系，应先将构建的质粒线性化，然后导入到培养的哺乳动物细胞中，并通过一定的转染方法使质粒和细胞融合。然后，可以通过细胞池筛选、单克隆筛选、细胞传代培养等步骤来获得稳定的转染细胞系。稳定细胞系的培养可以长期稳定地生产目标蛋白。

Q5：细胞转染方法有哪些，技术原理是什么?