Q1：检测结果为空白

A1：

1) 若阳性对照与阴性对照均正常：

样本不含目的蛋白或目的蛋白含量较低，可调整样本量，尽可能以最大上样量安排检测。

2) 若阴性对照也出现条带：需安排重复实验，求证实验结果的真实性，或阴性对照不合适，更换阴性对照。

3) 若阳性对照也无条带：

a．实验体系方面：内参抗体验证实验体系，同时确保阳性对照正常；

b．抗体原因：检查一抗与二抗种属信息是否匹配；调整抗体用量与稀释比；加长抗体孵育时间；

c．封闭剂与一抗或者二抗有交叉反应：更换封闭剂。

d．转膜不充分或洗膜过度：使用丽春红染色检测转膜效果，若有问题需调整转膜的时间与电流，探索最佳洗膜时长与次数。

e．曝光问题：更换曝光液、增加曝光时长。

Q2：背景深

A2：

1) 膜干燥：需注意膜的保湿，把握好实验操作时间；

2) 封闭不充分：需要加长封闭时间或更换封闭剂；

3) 二抗孵育非特异结合或与封闭剂反应：可设置不加一抗对照组求证二抗是否存在非特异性结合，或者降低二抗浓度。

4) 洗膜不充分：可增加洗膜时间与洗膜次数。

Q3：条带多

A3：

1) 样本方面：样本制样不佳会导致蛋白降解等问题引起检测结果不佳，建议重新制样。

2) 抗体方面：抗体特异性不佳会导致出现多带现象，需更换更优质的抗体，或调整抗体的稀释比与用量优化检测结果。

Q4：条带形状不平整

A4：

1) 条带中间下凹呈微笑状：可能原因为凝胶冷却不均匀；电泳洗脱温度偏高。需在配置凝胶时注意灌胶的时间，保证胶的均一性。转膜时将电泳仪置于冰浴环境，从而降低温度。

2) 条带中间上凸呈皱眉状：可能是由于装置不合适，凝胶和玻璃挡板底部有气泡，或者两边聚合不完全。需在灌胶过程中注意避免气泡，选用合适的装置。

3) 拖尾：样本溶解不完全。需要重新煮样或制样。

Q5：检测值与理论值不符

A5：理论值是根据氨基酸个数计算所得值，没有考虑到蛋白的修饰与多聚体等因素，例如糖基化会导致蛋白偏大，故遇上检测结果与理论结果不符的情况，建议查找资料明确蛋白是否存在修饰等，若无明确文献支撑，建议送质谱等其他手段进一步确认是否为目的蛋白。