SDS-PAGE（十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）是由Ulrich K. Laemmli开发的一种不连续的电泳系统，通常被用来分离分子质量在5到250 kDa之间的蛋白质。十二烷基硫酸钠（SDS，也被称为十二烷基硫酸钠）和聚丙烯酰胺凝胶的联合使用可以消除结构和电荷的影响，蛋白质仅根据其分子量的差异被分离。在大肠杆菌表达纯化外源蛋白的实验中，SDS-PAGE是必不可少的，通常用于检测蛋白的表达情况（目的蛋白的表达量、表达分布、纯度等）。

1. SDS-PAGE的原理

SDS-PAGE的原理是，当置于电场中时，带电分子会以相反的信号迁移到电极上。带电分子的分离取决于带电分子的相对迁移率。

由于电泳过程中阻力较小，较小的分子迁移得更快。蛋白质的结构和电荷也影响迁移的速度。十二烷基硫酸钠和聚丙烯酰胺消除了蛋白质的结构和电荷的影响，蛋白质根据多肽链的长度被分离。

2. SDS在SDS-PAGE中的作用

SDS是SDS-PAGE样品缓冲液中的一种洗涤剂。SDS可以断开分子内和分子间的氢键，破坏蛋白质分子的二级和三级结构；而DTT（或β-巯基乙醇）是强还原剂，它可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键。

3. 样品处理方法

根据样品分离的目的进行分类，主要有三种处理方法：还原SDS处理、非还原SDS处理、带有烷基化作用的还原SDS处理。

Ø 还原SDS处理

在上样buffer中加入SDS和DTT（或β-巯基乙醇），使蛋白质构象被解离，电荷被中和，从而形成了SDS与蛋白相结合的分子，在电泳中，只根据分子量大小分离。一般情况电泳均按这种方式处理。

样品稀释至适当浓度，加入上样Buffer，离心，沸水煮5min，再离心加样。

Ø 带有烷基化作用的还原SDS处理

碘乙酸胺的烷基化作用可以长期牢固的保护SH基团，从而得到较窄的谱带；另外，碘乙酸胺也可以捕集过量的DTT，防止银染时的纹理现象。

100μL样品缓冲液中10μL 20%的碘乙酸胺，并在室温保温30min。

Ø 非还原SDS处理

样品中只加入SDS，而不加DTT还原剂，此时二硫键不能断裂，所以蛋白没有完全去折叠，保持一定的4级结构。适用于生理体液、血清、尿素等样品。

一般只用1%SDS沸水中煮3min，不可作为测定分子量来使用。

4. 染色方法

在电泳分离结束后，所有的蛋白质按大小分类，然后可以用其他方法进行分析，例如蛋白质染色，如考马斯亮蓝（最常见、最容易使用）、银染（灵敏度最高）、全染色、氨基黑10B染色、固绿FCF染色等。跑胶时，一般同时加入分子量标记（Marker）来估计大小。下图左为考马斯亮蓝染色结果，右为银染结果。

考马斯亮蓝染色结果	考马斯亮银染结果

5. SDS-PAGE电泳常见问题及解决方案