GST（谷胱甘肽巯基转移酶）能特异的与谷胱甘肽结合，表现为酶和底物的作用原理。利用这个原理，将GST做成标签表达出融合蛋白，与带谷胱甘肽配基的亲和介质特异性结合，从而纯化出目标蛋白，再用特异性的酶将GST标签切除而最终得到天然蛋白。

GST融合蛋白纯化的特点有：纯度高、纯化条件温和、保持蛋白活性、促进蛋白可溶性表达，且该标签可以被切除。

而在纯化过程中偶尔也会遇到一些常见问题，下面就针对GST标签蛋白纯化中常遇到的问题——GST标签蛋白不能被高效的洗脱， 进行梳理和解答。通常情况下，GST纯化使用的缓冲液成分如下图所示：

可能的原因1：

洗脱缓冲液的体积或者洗脱时间不够。
建议：
增加洗脱缓冲液的体积。有些情况下，尤其是柱上酶切标签蛋白时，需要更大体积的缓冲液来洗脱标签蛋白。或通过降低洗脱过程中的流速来增加洗脱时间。对于离心方法，可以尝试降低洗脱过程中的离心速度。

可能的原因2：

洗脱缓冲液的pH过低。
建议：
增加洗脱缓冲液的pH值：将pH增加到8-9会增强洗脱而不用提高洗脱所用谷胱甘肽的浓度。

可能的原因3：

洗脱缓冲液的pH过低。
建议：
增加洗脱缓冲液的pH值：将pH增加到8-9会增强洗脱而不用提高洗脱所用谷胱甘肽的浓度。

可能的原因4：

洗脱缓冲液的离子强度过低。
建议：
增加洗脱缓冲液中的离子强度，在洗脱缓冲液中加入0.1-0.2M的氯化钠也可能会使结果变好。

可能的原因5：

非特异的疏水相互作用导致蛋白和柱材非特异的结合或聚集，从而阻止了标签蛋白的溶解和洗脱。
建议：
向洗脱缓冲液中加入非离子去垢剂。加入1%的TritonX-100或2%的n-octylglucoside可以显著提高某些GST标签蛋白的洗脱。

可能的原因6：

洗脱缓冲液中的谷胱甘肽被氧化了。
建议：
使用新鲜的洗脱缓冲液；加入DTT。