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Western Blot服务

卡梅德生物(KMDTM Bioscience)多年来致力于蛋白表达研究。我们的科学家积累了丰富的实验操作经验,能够在较短时间内快速将指定实验完成,同时保证检测结果准确、客观、可信。卡梅德生物建立了完善的蛋白平台,拥有精密的蛋白检测设备及技术,能够提供从重组蛋白制备到蛋白表达及纯化,蛋白功能研究等一站式技术服务,保证高品质的服务内容。我们可以为客户提供Western Blot等常用的免疫学检测服务。

Western Blot即蛋白质印迹法,又称免疫印迹(immunoblotting),是定性、定量检测蛋白表达的常用技术方法之一。Western Blot的主要目的是检测样本(组织或细胞)中某种蛋白质(即靶蛋白)是否表达以及表达的相对丰度。通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品中目的蛋白特异性识别结合,根据着色的位置和着色深度可以分析细胞或组织中特定蛋白水平的表达情况。该技术是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术,因此兼备SDS-PAGE的和固相免疫测定两种技术的高分辨力和高特异性,其作为一种方便可靠的研究工具,与质谱和蛋白质芯片等技术在蛋白质组学中发挥着重要作用。

Western Blot实验服务发展到如今已经成熟,应用也很广泛。但是要得到一份背景清晰、条带明亮、真实客观的实验结果并不容易,需要投入大量的时间和精力。卡梅德生物在实验操作细节上具有总结的技巧,有着严格质控点,严谨的预实验设置,能够针对不同客户的样品量身定制不同的实验方案,并提供清晰、完整的Western Blot实验结果,节省客户宝贵的科研时间,以高质量满足客户需求。

 

项目

Western Blot实验

实验原理

该技术是根据抗原抗体的特异性结合原理来检测复杂样品中的某种蛋白质。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离细胞或者组织样本中的蛋白,经转膜、封闭后目标蛋白与特有性一抗结合,再与辣根过氧化物酶(HRP)标记的第二抗体起反应,经过底物显色,分析曝光条带的位置和灰度分析获知目标蛋白在样本中的表达情况

应用

·广泛应用于蛋白表达水平检测

·鉴定某种蛋白质,也可以对目标蛋白进行定量和半定量的分析

·可用于蛋白-蛋白、蛋白-DNA和蛋白-RNA相互作用的后续分析

优点

·所需要的设备方便,成本低,使用灵活

·操作简单,结果一般比较稳定,而且阳性结果一般较为可靠

·结果分析与质谱相比较为容易

 

Western Blot实验主要流程:

 

目前,Western Blot因其便捷的优点,加之电泳及电转设备、抗体和信号检测系统的成熟商品化,多种技术不断进步共同提高了检测的灵敏度,使得Western blot技术成为几乎每一个进行蛋白质研究的实验室至关重要的实验之一。在一般的实验室中都能够进行Western blot技术操作,但在实验过程中也会经常遇到各种问题。

 

Western Blot实验中经常出现的问题及对策:

 

实验问题

可能原因

推荐办法

 

 

目的条带未显现

目的蛋白的表达量过低

提高上样量,浓缩目的蛋白,采用更高灵敏度的试剂盒

使用抗体效价不足

使用新配制的一抗,避免反复冻融;增加一抗或者二抗浓度,适当延长孵育时间

转膜效率低

选择合适的转膜方式,提高转膜效率

非平行、弯曲条带

电泳迁移速度过快或迁移温度过高

调整电泳设置如PH值、电压等,电泳时降低环境温度。

 

背景过高

封闭条件不合适

延长封闭时间或更换封闭剂

抗体浓度过高

降低一抗/二抗浓度并延长孵育时间

抗体与封闭剂发生交叉反应

加温和去污剂如Tween20

 

我们的服务优势:

 

--针对不同的蛋白样品,卡梅德生物采用不同的蛋白浓度测定方法(Lowry法或BCA法)

--保证实验的质量,严格的QC质控:利用内参准确定量,同一样品,蛋白浓度定量值多次实验间差异小于8%

--不同人员之间可重复性:保证结果的准确性

--完整的技术服务,我们能够提供从基因合成,细胞转染,载体构建,蛋白表达及纯化,蛋白功能研究等技术服务

--多年的抗体研究经验,对抗体选择具有丰富的知识储备,能从根源上避免假阳性结果

 

如何订购?

 

如果您对我们的服务项目感兴趣,请直接拨打热线电话:+86-022-8216-4980/156-0119-0182或发送邮件至info@kmdbioscience.com