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噬菌体展示技术服务

卡梅德生物能为客户提供基于自有噬菌体抗体文库平台技术制备的多物种单克隆抗体制备服务,如人,鼠,兔,鸡,羊,鹅,猪,牛,马,驴,骆驼,羊驼,鲨鱼等物种来源的单克隆抗体,满足不同客户的科研要求。 

 

噬菌体抗体文库技术平台 

噬菌体展示技术(phage displayed technology,PDT)是将外源蛋白或多肽与噬菌体外壳蛋白融合,展示在噬菌体表面并保持特定的空间构象,利用特异性亲和作用以筛选特异性蛋白或多肽的一项新技术。1985年Smith,G.P提出将外源基因插入改建过的噬菌体外壳蛋白基因,表达含有外源蛋白或多肽的融合蛋白,这种带有融合蛋白的噬菌体称为融合噬菌体。通过吸附-洗脱-扩增的重复过程,将含有能与靶蛋白特异结合的外源蛋白的噬菌体从表达各种外源蛋白的噬菌体库中筛选出来,然后进行富集、扩增及基因序列测定,推断外源蛋白的氨基酸组成。该技术将基因型与表型、分子结合活性与噬菌体的可扩增性结合在一起,是一种高效的筛选新技术。目前已成功应用于抗原表位分析,单抗筛选,蛋白质功能拮抗多肽或模拟多肽的确定等。在药物筛选、疫苗设计等方面发挥重要作用。

将待筛选基因(数量可在109以上)插入噬菌体信号肽序列与主要衣壳蛋白基因VIII或基因III之间,每一个噬菌体只含有一个外源基因,即可构建成含有109种融合蛋白的噬菌体肽库,每一个噬菌体只表达一种外源肽或蛋白,且呈现在噬菌体表面,而且不影响噬菌体的完整性。

 

利用展示的多肽与目的蛋白(主要是抗体、抗原及一些细胞生长因子受体等)或其他生物大分子亲和的性质可高效率地筛选出特异多肽。即先将靶蛋白固相化,如结合在塑料板(96孔板)上,加入文库噬菌体与之反应。经过洗涤,未结合的噬菌体被洗掉,有亲和力的噬菌体即被俘获,俘获的噬菌体经洗脱后再感染大肠杆菌进一步扩增。这样一种“吸附-洗涤-扩增”的富集过程称为淘筛。一轮淘筛可以使噬菌体富集103倍,经过几轮淘筛就能从109~1010 的噬菌体肽库中筛选得到与靶蛋白相互作用的短肽,一般要进行3~4轮淘筛。亲和筛选的关键在于靶蛋白与短肽间的特异性结合,但往往由于一些原因,如短肽的多价表达,使得一些非特异结合的短肽也被筛选出来。为了增加筛选的特异性,在筛选的过程中都是不断地降低筛选配基的浓度,从而保证被筛选得到的短肽与靶蛋白有较强的亲和力,即它们的结合是特异性的。

 

卡梅德生物利用M13丝状噬菌体壳蛋白pIII和PVIII展示技术,能够为客户构建不同物种的天然或者免疫的噬菌体抗体展示文库,并且库容量可达1011

 

卡梅德生物的噬菌体抗体展示技术平台服务优势:

*可溶抗原的快速制备能力:结合公司现有的重组蛋白表达体系,能够在短时间内制备出高纯度、高生物学活性的可溶抗原蛋白,用以支持噬菌体抗体的免疫及筛选工作。

*成熟稳定的免疫文库构建技术:目前我们获得的噬菌体一级免疫文库的库容可高达108 ~ 109,其序列丰度>99%,保证直接筛选获得的抗体亲和力达到nM甚至pM级别。

*快速可靠的候选抗体筛选及初步鉴定技术:根据不同的抗体药物功能需求,开发了多种筛选体系,包括直接筛选法、竞争法、负筛选发、细胞筛选法等。