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人源Fab抗体文库构建服务

获得杂交瘤单克隆抗体序列信息是进行抗体重组改造,抗体药物发现的基础;而抗体的Fab片段则是抗体重组改造的主要区域,这是因为抗体Fab片段是抗原结合区域,涉及到抗体-抗原结合的亲和力,抗体特异性等特征。抗体Fab片段含有1个可变区(V区)和1个恒定区(C1)(如下图所示):V区含有3个互补决定结构域(CDR),涉及到独特型抗体的产生,抗体的超频突变,尤其是CDR3结构域是抗体工程改造的核心区域;C1区主要起结构支撑作用。

抗体文库制备服务 – 人源Fab抗体库构建服务

构建Fab抗体文库是获得高质量,高亲和力药物抗体的有效途径之一,高库容量(109-1012)的噬菌体展示Fab抗体文库极大提升了抗体工程改造速度,如重组人单克隆抗体,嵌合抗体的制备速度。

---Fab抗体库设计理念

噬菌体展示Fab抗体文库的核心在于提升独立噬菌体展示克隆的数量,在卡梅德生物的实验室中,我们的科学家努力将抗体的可变区(VH和VL)基因,尤其是CDR区域(互补决定区)采用不同的策略和方式,如氨基酸突变,移码读框等形成数目庞大的独立克隆。此外我们提供更加先进的理念,我们设计了一套方案:在体外对人外周血单核细胞进行敏化处理后,通过流式分选技术分离出高亲和力的单核细胞,进行EBV单克隆化处理,利用该方法能够获得高度一致性的单核细胞克隆,再进行文库建设。

---噬菌体宿主体系选择

卡梅德生物拥有M13,T4和T7噬菌体展示系统,根据客户的项目需求(展示的蛋白或抗体片段的大小等参数),我们会采用不同的噬菌体系列进行文库构建。

 

项目流程:

 

步骤

服务内容

周期

 

外周血单核细胞单克隆化

1.获取外周血单核细胞

2.单核细胞敏化

3.EBV病毒单克隆化

4.流式细胞分选后单克隆培养

8-12

 

抗体cDNA制备

(客户可以提供细胞)

1. RNA提取

2. 高保真RT-PCR制备cDNA

3. 系统对照:Actin特异引物PCR扩增,以鉴定逆转录产品cDNA质量

 

构建抗体库

1. 引物设计与合成:抗体可变区兼并引物设计、合成

2. cDNA为模板,PCR扩增抗体重链和轻链可变区基因

3. scFv基因拼接

4. 噬粒构建与转化:酶切、连接scFv和噬菌粒载体,电击转化TG1宿主菌,构建抗体库

5. 鉴定:随机挑选20-50个克隆,PCR鉴定阳性率,测序和分析抗体序列

6. 包装,>11013噬菌体颗粒/ml

 

交付

*构建报告,包括详细建程序,代表性序列信息。

*产品交付:细菌和噬菌体两种形式抗体库。

 

 

注 :1.客户提供人外周血淋巴细胞,淋巴结细胞或脾脏细胞(保存在RNA later等溶液中,避免RNA降解,蓝冰运输),从第二步开始制备Fab抗体文库,只需8-9周即可完成。

2. 采用TriZol溶液制备细胞裂解物,干冰运输。 

 

项目特征:

*免疫,天然和合成抗体噬菌体文库构建

*周期短:预制抗体文库筛选服务

*高库容量:独立克隆数 107 - 1012

*高亲和力抗体制备:10-7 - 10-13

*多种噬菌体展示系统:M13,T4,T7

*个性化的淘筛策略

*严禁完整的QC标准