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Pull Down实验服务

卡梅德生物(KMDTM Bioscience)多年致力于蛋白相互作用研究,蛋白质相互作用能够揭示分子之间的相互作用模式,是蛋白质结构与功能研究中的一个重要方向。我们拥有丰富的重组标签蛋白表达经验,能够在原核和真核表达系统为客户表达带有GST,Myc-tag, Flag-tag, HA-tag等标签的重组蛋白;同时,卡梅德生物拥有精密的检测设备及成熟的技术,我们的免疫共沉淀以及Pull Down技术来源于日本京都大学IPS实验室,保证了实验的准确性。卡梅德生物坚持为客户提供高品质的服务内容,能够提供从重组蛋白制备到pull down蛋白互作检测等一站式技术服务,满足不同客户的需求。

Pull Down实验服务是在体外条件下检测分子间相互作用的方法。通过该技术可以验证蛋白间的相互作用或筛选获取相应的目的蛋白。Pull down实验与免疫共沉淀技术相似,不同之处在于免疫共沉淀技术是用抗体交联磁珠或琼脂糖,该技术则利用蛋白与蛋白,蛋白与其他生物分子之间的相互作用进行目标分子的捕捉和研究。其原理是带有标签的诱饵蛋白被特异结合该标签的固相化亲和配基捕获,产生“次级亲和支持物”,用于纯化与诱饵蛋白相互作用的其他蛋白。通过SDS-PAGE电泳分析,或结合Western blot验证和LC-MS/MS,对纯化洗脱后的蛋白复合物进行进一步鉴定,就能检测出与诱饵蛋白相互作用的蛋白质。

卡梅德生物已经建立并完善了GST融合蛋白pull-down技术和链霉素标记pull-down技术,这两种技术分别用于蛋白与核酸(RNA/DNA)的研究。

 

免疫学检测服务 —GST pull-down实验

 

GST Pull-down又叫做蛋白质体外结合实验,是在体外条件下验证或寻找蛋白质间相互作用的方法。

 

项目

GST pull-down实验

实验原理

该技术是利用了GST对谷胱甘肽(GSH)偶联球珠的亲和性,首先采用重组表达技术表达带有GST(谷胱甘肽转移酶)标签的鱼饵蛋白,再利用该鱼饵蛋白和细胞裂解液进行孵育,捕获能够与鱼饵蛋白结合的靶分子,然后加入带有谷胱甘肽(GSH)标记的琼脂糖珠子,GSHGST的催化作用下将蛋白复合物链接到琼脂糖珠子上,低速离心收集上述复合物从而进行后续SDS-PAGE等分析。

应用

·可证明预测的蛋白质-蛋白质间可能存在的相互作用

·寻找与已知蛋白发生相互作用的未知分子

优点

·多采用标签(如GST)抗体来检测,适用范围广

·操作简单,是可直接检测蛋白质间相互作用的有效方法

 

 

GST pull-down 实验流程:

 

免疫学检测服务 — RNA/DNA pull-down实验

 

RNA/DNA pull-down是研究体外条件下RNADNA与蛋白互作的重要技术。

 

项目

RNA/DNA pull-down实验

实验原理

该技术是通过体外转录目的RNA的一部分或全长,用生物素标记RNA/DNA探针,与胞浆蛋白提取液孵育,形成RNA/DNA蛋白质复合物。再利用链亲和素标记的磁珠或琼脂糖珠,将上述复合物从细胞裂解中分离开来。然后进行洗脱,SDS-PAGE或银染等验证靶标分子。

应用

·可验证某种蛋白与目的RNA/DNA是否有相互作用

·纯化的蛋白经质谱鉴定,即可筛选到与目的RNA结合的蛋白

优点

·该技术是捕获RNA/DNA-蛋白复合体的常用方法

·能够进行目的RNADNA的互作蛋白验证或筛选,如验证或寻找特定基因的转录因子

 

RNA/DNA pulldown 实验流程:

我们的服务优势:

--熟练的实验操作水平,设置对照和重复,排除随机干扰因素影响,保证结果更加可靠;

--使用银染技术,灵敏度更高,SDS-PAGE电泳结果更加清晰;

--具有成熟的蛋白平台,提供pull down 产物,融合质粒,SDS-PAGE结果和Western Blot结果;

--完整的信息分析,提供详细的实验报告,可提供蛋白质鉴定结果(质谱结果);

--能够提供从GST蛋白制备到蛋白互作检测的一站式服务,节省客户宝贵时间

如何订购?

如果您对我们的服务项目感兴趣,请直接拨打热线电话:+86-022-8216-4980/156-0119-0182或发送邮件至info@kmdbioscience.com