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内毒素检测服务

卡梅德生物科技采用的内毒素检测方法是动态浊度法,来自《2015版中国药典》。

动态浊度法是指通过检测反应混合物的浊度到达预先设定的吸光度所需要的反应时间,或是检测浊度增加速度来检测内毒素的方法。在适宜的条件下(温度,pH值及无干扰物质),细菌内毒素激活C因子,引起一系列酶促反应,使鲎试剂产生凝集反应形成凝胶。随着凝胶的形成,反应液的吸光度(OD值,浊度)增加,OD值增加的速度与内毒素浓度成正相关。换言之,OD值上升某一预设限值(启动OD)所需要的时间(定义为启动时间)与内毒素浓度成负相关,启动时间的对数与内毒素浓度的对数成线性关系,据此,可以定量检测供试品的内毒素浓度。客户也可以要求我们提供半定量方法-凝胶法进行样品内毒素限度水平检测。

卡梅德生物内毒素检测反应原理图:

实验流程:

1.动态光度测定仪器的设定:预热仪器,设置孵育温度为37℃,设定读板波长为340nm,设定读取波长和时间。

2. 标准内毒素溶液配制

1)标准品设置浓度点:0.5,0.25,0.125,0.0625EU/ml 或10,1,0.1,0.01EU/ml

2)取内毒素工作标准品1支,加入适量(0.5 ml-1.2 ml)细菌内毒素检查用水,置旋涡混合器上剧烈振摇3-5分钟。

3)标准毒素溶液每一步操作取样之前都需要旋涡振荡30秒以上。

3. 设置阴性对照:细菌内毒素检查用水,其他操作与样品相同。

4. 鲎试剂的溶解:按标示量加细菌内毒素检查用水于鲎试剂中,轻轻振摇使鲎试剂完全溶解。

5. 加样:去无热源试管,分别加入100μl细菌内毒素检查用水、内毒素标准溶液,或供试品。

6. 读数与结果计算。