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磷酸化抗体定制服务

卡梅德生物拥有多年的抗体制备经验,能够开发性能不弱于细胞信号转导公司(CST)磷酸化多克隆抗体和单克隆抗体。针对特定磷酸化位点的多克隆及单克隆抗体定制服务,目前交付成功率高达100%。我们提供提供全面的磷酸化抗体验证服务,包括磷酸化与非磷酸化的抗原交叉反应,Western Blot 和免疫组化。

 

抗体制备服务 — 磷酸化抗体制备

 

蛋白磷酸化是细胞中非常重要的后翻译修饰作用(PTM),主要涉及到蛋白生物活性水平的调节,包括活化或抑制蛋白质活性,从而进一步调节细胞信号转导通路。在真核生物中,蛋白质磷酸化位点为丝氨酸,苏氨酸和酪氨酸;在原核生物中磷酸化位点主要为组氨酸。卡梅德生物可为客户提供基于噬菌体展示技术的磷酸化单克隆重组抗体制备服务。 

 

基于噬菌体展示的磷酸化抗体制备服务:

卡梅德生物为客户提供的服务包括磷酸化位点的分析,磷酸化与非磷酸化多肽抗原设计与合成,噬菌体抗体文库构建以及抗体纯化与配对服务。

 

服务流程与内容:

 

步骤

服务内容

交付

抗原设计与合成

1. 客户提供抗原(多肽,蛋白),纯度>90%

2. 卡梅德设计与合成磷酸化与非磷酸化抗原(可选)

(抗原由卡梅德制备)

*磷酸化与非磷酸化抗原的MSHPLC 报告

*2-5 mg 磷酸化多肽纯度>90%

*2-5 mg非磷酸化多肽纯度>90%

动物免疫

方案一:免疫Balb/c 小鼠(采用独有小鼠免疫佐剂,20天即可快速产生高抗体滴度血清)ELISA检测血清效价

方案二:免疫2-3 新西兰大白兔(采用独有兔专用免疫佐剂,28天可产生高抗体滴度),ELISA检测血清效价(其他动物可选)

*1-2ml免疫前血清

*ELISA血清效价验证报告

抗体噬菌体展示文库制备

1. 收集免疫后的淋巴B细胞

2. 提取mRNAPCR克隆cDNA,噬菌体载体构建,转化,扩增

3. 磷酸化与非磷酸化抗原进行抗体文库正筛和反筛

4. 阳性克隆再进行扩增,穿梭质粒构建

5. 小规模与大规模哺乳体系表达(293CHO),抗体纯化与验证

*重组表达质粒

*2-5 mg 纯化重组抗体

*ELISA报告,含效价,交叉实验报告

*抗体识别磷酸化抗原效价不低于105且不与非磷酸化抗原反应(ELISA

*Western Blot验证报告(可选)

 

项目特征:

*高特异性:所制备重组单抗只识别特定磷酸化位点,与非磷酸化抗原无反应

*全程可追溯的文件支撑体系,GMP/GLP级别

*高抗体效价:保证型抗体ELISA效价可达~105

*多种制备规模:5,15,80L 发酵罐级别可选

 

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