服务热线
022-82164980

周一至周六

8:00-18:00

在线客服
 

技术服务

文档下载

联系我们

服务电话:022-82164980

地址:天津市武清区国际企业社区A5号楼四层,301700

邮箱:info@kmdbioscience.com

酵母双杂交系统

 

卡梅德生物(KMDTM Bioscience)多年来致力于酵母双杂交系统(Yeast two-hybrid system,Y2H)的研究。我们的酵母杂交系统是由基于SMART法构建的文库、酵母菌株、严谨的报告基因、高表达载体组成的。这项技术可用于:研究蛋白的相互作用;确认蛋白的交互作用;定义蛋白的交互域。 

酵母双杂交系统是一种体内方法,用于鉴定编码蛋白质与目标蛋白质相互作用的新基因技术。该系统为识别相互作用的蛋白质提供了多项创新,双杂交系统是第一个检测相互作用蛋白的遗传和分子方法,该检测是在体内进行的,这样可以检测天然结构中的相互作用蛋白。因此,双杂交系统在检测微弱和瞬时蛋白质相互作用方面具有无与伦比的灵敏度。此外,双杂交系统能够简捷地得到编码相互作用蛋白的基因序列,它只需构建质粒而不必准备抗体或纯化蛋白,无需其它体外检测蛋白之间相互作用方法所必须的蛋白抽提、纯化等繁琐步骤。双杂交系统可用于筛选文库中编码与已知靶蛋白相互作用的蛋白质的基因,或测试已知蛋白质的相互作用。

 

 酵母双杂交系统(Y2H)原理:

 

传统Y2H检测的原理是利用报告基因,其激活依赖于特定的转录因子。具体而言,待测蛋白质X和Y分别与 DNA 结合域 (BD) 和转录因子的激活域 (AD) 融合。BD-X 融合蛋白与报告基因启动子的上游激活子序列 (UAS) 结合。在X和Y之间相互作用时,AD将被募集到启动子,并重建功能性转录因子,从而触发报告基因的后续转录(图1)

作为一种基因技术,酵母双杂交筛选提供了一种敏感且经济的方法来测试两个目标蛋白之间的直接相互作用,或使用蛋白质作为诱饵来筛选从所需的细胞类型、组织或整个生物体制备的蛋白质片段库。通过测序所选酵母菌菌落中相应的质粒,确定相互作用。

1 Y2H基本原理示意图

 

实验步骤

 

①创建BD-X诱饵;②通过BD-X诱饵测试自我激活;③执行酵母双杂交筛选和识别猎物

 

 Y2H检测服务

 

为了研究大量蛋白质的相互作用,科学家根据Y2H系统,开发了几种系统以适应不同蛋白质的不同亚细胞定位和生化特征。KMD  Bioscience为客户提供多种系统的服务,以适应不同项目的不同需求。

酵母单杂交系统:研究蛋白质-DNA下相互作用(原理见图2

 

2 Y1H原理示意图

酵母三杂交系统:研究第三成分介导的蛋白质的相互作用(原理见图3

3 Y3H原理示意图

● 分裂泛素Y2H系统:用于研究膜蛋白(原理见图4

4 分裂泛素Y2H原理示意图 

 

服务范围

 

--我们提供一站式服务:从构建文库到阳性克隆的筛选,这样可提高效率,避免错误,从而为客户从客观上节省费用。

服务内容:

--将诱饵靶基因连接到Y2H载体中去,并测序。诱饵靶基因可以是一段基因(酶切)或全长基因

--测试诱饵基因的自我激活能力和毒性。

--文库筛选和交互验证。

--阳性克隆的分离提取和DNA的测序。

 

客户提供

 

--不少于2 的质粒(含诱饵靶基因)

--该基因的DNA序列,以便我们设计合成方案,进行人工合成(需收费)

交付内容:

--阳性克隆若干及DNA测序结果

--每个阳性克隆不少于2㎍ 质粒

实验周期:约6-8周

 

服务优势:

 

--技术专家直接服务,满足不同检测需要;

--高准确度分析仪器,经验丰富的操作以及严格的质量管理,保证结果精准可靠;

--检测效率高,检测过程实时监控;

--仪器检测灵敏度更高,样品消耗量更低;

--实验周期更短,节省客户的等待时间;

--提供真正的一站式服务:从构建文库到阳性克隆的筛选,这样可提高效率,避免错误,从而为客户从客观上节省费用

 

服务流程:

 

 

如果您对我们的服务项目感兴趣,请直接拨打热线电话:+86-022-8216-4980/156-0119-0182或发送邮件至info@kmdbioscience.com