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DNA甲基化测序服务

卡梅德生物拥有完善的分子生物学和免疫学检测试验平台,能够为广大科研用户提供分子杂交服务,包括斑点杂交实验,免疫印迹等基础服务。

 

分子生物学服务 — 甲基化DNA测序

DNA甲基化是最早发现的基因表观修饰方式之一,真核生物中的甲基化仅发生于胞嘧啶,即在DNA甲基化转移酶(DNMTs)的作用下使CpG二核苷酸5’-端的胞嘧啶转变为5’-甲基胞嘧啶。DNA甲基化通常抑制基因表达,去甲基化则诱导了基因的重新活化和表达。这种DNA修饰方在不改变基因序列前提下实现对基因表达的调控。脊椎动物DNA的甲基化状态与生长发育调控密切相关,例如在肿瘤发生时,抑癌基因CpG岛以外的CpG序列非甲基化程度增加,CpG岛中的CpG则呈高度甲基化状态,导致抑癌基因表达的下降。我们能够为您提供三种解决方案:

 

亚硫酸氢盐电泳法:基因组DNA经亚硫酸氢盐处理后,未甲基化胞嘧啶(C)被转化为尿嘧啶(U),甲基化胞嘧啶不发生改变。设计不同的引物分别针对甲基化和非甲基化DNA序列,通过电泳检测PCR扩增产物进行甲基化位点鉴别。

 

亚硫酸氢盐测序法:基因组DNA经亚硫酸氢盐处理后,未甲基化胞嘧啶(C)被转化为尿嘧啶(U),甲基化胞嘧啶不发生改变。设计不同的引物分别针对甲基化和非甲基化DNA序列,通过测序检测PCR扩增产物进行甲基化位点鉴定。

 

高分辨率熔解曲线法 — 实时RT-PCR:设计一对针对亚硫酸氢盐处理后DNA双链的引物,若位于引物对中间DNA片段存在甲基化位点,由于经过亚硫酸氢盐处理后未甲基化胞嘧啶(C)被转化为尿嘧啶(U),导致样品中GC含量发生改变,从而导致熔解温度的变化。