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蛋白质N端测序服务

卡梅德生物提供高质量的蛋白质N端测序服务,通过Edman降解法能够精准的测定蛋白质N端多达67个氨基酸序列。

 

基于Edman降解法的蛋白N-端测序

Edman法测定单个氨基酸循环包括3步:第一步是在碱性条件下,PITC与蛋白N端的游离氨基结合;第二步是在酸性溶液中,N端残基被切除;第三步是PITC结合的残基转化成为更为稳定的PTH残基,经过在线的HPLC分析,根据洗脱时间最终确定氨基酸种类。

测序步骤:蛋白样品一般先进行SDS-PAGE的分离,保证样品的纯度满足测序的要求;随后将SDS-PAGE上的蛋白样品转移到PVDF膜上;经过染色确定把蛋白条带并切出;Edman测序仪对得到的PVDF膜上的蛋白样品进行分析。测序原理如图1所示:

1 Edman降解法测序原理

Edman测序(N端测序)机器型号:PPSQ-31A

2 PPSQ-31A 蛋白质N端测序仪器

样品要求:

--PVDF转膜样品:具体转膜条件请参照附件请使用PVDF膜,不要用硝酸纤维素膜(NC膜),考马斯亮蓝R250或丽春红染色

--蛋白冻干粉:纯度大于95%则不需要转膜,样品缓冲液需要不含盐,提供20-60ug

--天然纯化多肽样品:HPLC纯度>95%,提供约100ug

--超长氨基酸检测:蛋白质N端长达67个氨基酸测序

 

项目服务特征:

--蛋白表达及pulldown产物的鉴定:重组蛋白氨基酸顺序验证以及各种免疫沉淀蛋白产物的验证

--细胞株表达产物的验证:验证细胞株建立和发酵过程中蛋白产物N端甲硫氨酸和信号肽是否正确处理

--抗体药物N端序列验证

--天然提取,分离纯化的小分子多肽序列鉴定

--周期快:2-3

案例:

某种天然纯化小分子多肽样品:蛋白经过冻干处理后复溶调整蛋白浓度至1ug/ul;上样体积50ul

柱信息: C18,流速是0.6ml/min

3 HPLC分离图谱

 

4N端第1位氨基酸图谱

 

5N端第2位氨基酸图谱

 

6N端第3位氨基酸图谱

  

7N端第4位氨基酸图谱

 

8N端第5位氨基酸图谱

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