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CRISPR/Cas9敲除细胞系构建服务

卡梅德生物(KMDTM Bioscience)多年来致力于细胞生物学技术研究。外源质粒DNA整合到宿主细胞染色体上,使宿主细胞可长期表达目的蛋白,称为稳定细胞系。高质量的稳定细胞系在生物学研究中扮演着重要的角色,包括医药开发、基因功能研究、重组抗体等。卡梅德生物在稳定细胞株构建方面积累了丰富的经验,我们的科学家拥有多年实验成功案例,熟悉实验环节中的每一步操作,尤其对关键步骤具有独到的经验,能够凭借精湛技术快速完成实验内容,为客户节省宝贵的时间和经费。目前我司已成功为众多科研客户构建获得大量目的细胞株。我们构建的细胞系可直接应用于下游的生物学研究。卡梅德生物建立了完善的细胞实验服务平台,提供一体化的工业生产式技术服务,我们与国内知名研发单位合作推出完备的CRISPR/Cas9载体系统,包括单敲除、双敲除、缺口酶、慢病毒敲除载体和敲除载体库等体系,并且每一个载体系统都有不同的标签(EGFP/RFP/Puro/Neo)可供选择,能够为客户提供快速、准确的基因敲除项目服务。卡梅德生物依托先进的技术和经验丰富的科研团队,可为客户提供系统的CRISPR/Cas9敲除细胞系构建服务。

CRISPR/Cas9(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)是新出现的一种由sgRNA指导Cas核酸内切酶对靶向基因进行特定DNA修饰的技术。CRISPR/Cas9系统广泛存在于原核生物基因中,是细菌和古细菌为应对病毒和质粒不断攻击而演化来的一种适应性免疫防御机制。在这些生物体中,来自噬菌体的外源遗传物质获得和整合入CRISPR位点。这些序列特异的片段被转录成短CRISPR的RNA(CRISPR-derivedRNA),crRNA通过碱基配对与tracrRNA(trans-activating RNA)结合形成双链RNA,然后tracrRNA/crRNA复合体指导Cas9蛋白切断双链DNA。

利用CRISPR/Cas9技术能够进行目的基因敲除细胞系的构建。该技术通过RNA指导Cas9核酸酶对靶向基因进行特定DNA编辑。CRISPR-Cas9系统的基因编辑效率更高,Cas9系统的载体构建与使用也更加便捷,随着CRISPR/Cas9技术的不断发展,该技术已广泛应用在各物种中,是目前普遍使用的基因编辑技术。

 

CRISPR/Cas9系统技术:

 

 

CRISPR/Cas9技术

实验原理

该技术的工作原理是:在IICRISPR系统中,CRISPR RNAcrRNA)通过碱基配对与转录激活crRNATrans-activating crRNA, tracrRNA)退火形成能够特异识别基因组序列的复合体,然后通过PAM5’-NGG-3’)序列结合并侵入DNA,引导Cas9核酸内切酶在目的片段生成DNA双链断裂(double-strand breaks, DSBs)。 这个识别复合体可以通过融合crRNAtracrRNA序列形成sgRNAsingle-guided RNA)进行简化。融合的RNA具有与野生型RNA类似的活力,但由于结构得到了简化,更方便研究者使用。通过将表达sgRNA的元件与表达Cas9的元件相连接,得到可以同时表达两者的质粒,将其转染细胞,便能够对目的基因进行操作。

优点

·具有编辑效率高、构建简单、操作方便等优点

·使用更加严苛的筛选标准,可以更有效地去除假阳性

·能够成本低廉地实现高效灵活的基因敲除

·具有广谱性,无基因、细胞及物种限制

·可实现多个靶位点同时进行基因打靶

·功能丰富,可实现敲除、插入、抑制、激活等多种目的基因

 

 

1CRISPR/Cas9介导的基因组编辑原理图

 

项目流程:

我们的服务优势:

 

--能够准确的敲除指定的基因,提高基因敲除效率:在稳定表达Cas9蛋白的细胞系上进行基因敲除比瞬时转染Cas9进行基因敲除的效率更高;

--可对同一细胞进行多个基因敲除实验:对于需要在同一个细胞系中进行多个基因的编辑或需要长期用一个细胞模型进行多项基因研究,先构建一个Cas9蛋白稳定表达的细胞系可显著提高后续实验的效率,降低实验难度;

--提供多种不同荧光和抗性标记的表达载体,更易筛选到基因敲除成功的细胞;

--经验丰富的实验技术人员,GMP级的操作水平,实验体系成熟,数据结果交付周期快,成功率高,可为您提供高品质的技术服务;

--系统稳、脱靶低、性价比高,服务透明化;

--具备完善的细胞、蛋白等服务平台,能够提供从gRNA设计到蛋白检测等一站式技术服务

 

如何订购?

 

如果您对我们的服务项目感兴趣,请直接拨打热线电话:+86-022-8216-4980/156-0119-0182或发送邮件至info@kmdbioscience.com