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CRISPR/Cas9敲除细胞系构建服务

外源质粒DNA整合到宿主细胞染色体上,使宿主细胞可长期表达目的蛋白,称为稳定细胞系。高质量的稳定细胞系在生物学研究中扮演着非常重要的角色,包括药物开发、基因功能研究、重组抗体等。然而构建一个有效的细胞系是一件复杂而费时的工作。卡梅德生物在稳定细胞株构建方面拥有丰富的经验,熟悉实验环节中的每一步操作,尤其对关键步骤具有独到的经验,我们构建的细胞系可直接应用于下游的生物学研究,目前我司已成功为众多科研客户构建获得大量目的细胞株。卡梅德生物依托先进的技术和专业的科研团队,可为您提供:

*CRISPR/Cas9敲除细胞系构建服务

*IOS过表达稳转细胞系构建服务

*IOS沉默稳转细胞系构建服务

*精确定点整合细胞系构建服务

 

CRISPR/Cas9敲除细胞系构建服务

鉴于CRISPR/Cas9技术的不断发展,卡梅德生物与国内知名研发单位合作推出的CRISPR/Cas9载体系统,包括单敲除、双敲除、缺口酶、慢病毒敲除载体和敲除载体库等体系,并且每一个载体系统都有不同的标签(EGFP/RFP/Puro/Neo)可供选择,致力于为客户提供快速、准确、高效的基因敲除项目服务。

CRISPR/Cas9(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)是新出现的一种由sgRNA指导Cas核酸内切酶对靶向基因进行特定DNA修饰的技术。在II型CRISPR系统中(图1所示),CRISPR RNA(crRNA)通过碱基配对与转录激活crRNA(Trans-activating crRNA, tracrRNA)退火形成能够特异识别基因组序列的复合体,然后通过PAM(5’-NGG-3’)序列结合并侵入DNA,引导Cas9核酸内切酶在目的片段生成DNA双链断裂(double-strand breaks, DSBs)。 这个识别复合体可以通过融合crRNA与tracrRNA序列形成sgRNA(single-guided RNA)进行简化。融合的RNA具有与野生型RNA类似的活力,但由于结构得到了简化,更方便研究者使用。通过将表达sgRNA的元件与表达Cas9的元件相连接,得到可以同时表达两者的质粒,将其转染细胞,便能够对目的基因进行操作。

图1:CRISPR/Cas9介导的基因组编辑原理图

 

 

项目流程:

 

服务优势:

*提高基因敲除效率:在稳定表达Cas9蛋白的细胞系上进行基因敲除比瞬时转染Cas9进行基因敲除的效率更高。

*可对同一细胞进行多个基因敲除实验:对于需要在同一个细胞系中进行多个基因的编辑或需要长期用一个细胞模型进行多项基因研究,先构建一个Cas9蛋白稳定表达的细胞系可显著提高后续实验的效率,降低实验难度。

*系统稳、脱靶低、性价比高。

*提供多种不同荧光和抗性标记的表达载体,更易筛选到基因敲除成功的细胞。