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重组蛋白酵母表达服务

卡梅德生物(KMDTM Bioscience)多年致力于重组蛋白表达与制备研究。我们的科学家拥有丰富的酵母(yeast)蛋白重组表达、发酵和纯化经验,能够快速为不同客户制定独具特色的蛋白酵母表达策略。

蛋白酵母表达系统兼具部分原核蛋白表达特征(培养条件简单、生长速度快、表达水平高、操作简便)和部分真核蛋白表达特征(蛋白翻译后能进行正确加工、修饰,合理的空间折叠)。重组蛋白酵母表达系统的优势主要表现在以下几个方面:重组蛋白既可以分泌形式又可以非分泌形式在酵母系统中表达,且能高水平表达,达到5g/L;外源蛋白基因可以以整合的方式插入到酵母染色体上,随染色体复制而不会丢失;酵母具有真核生物的亚细胞结构,具有糖基化、脂肪酰化、蛋白磷酸化等翻译后修饰加工功能,适合活性蛋白表达;容易实现超高密度发酵,卡梅德生物能同时为客户提供多种规格的蛋白酵母发酵规模,如500L发酵罐,配合我们全面的蛋白纯化平台,能够在较短周期内获得高质量的重组蛋白产品。

 

蛋白酵母分泌表达步骤与周期 

 

步骤

服务内容

周期

酵母表达载体亚克隆

*密码子优化,基因合成(或客户提供质粒模板:目的基因扩增)

*将目标基因亚克隆到合适的表达质粒上,可提供表达载体,如pPICZaA pGAPZaApPIC9K

*拼接序列验证:测序

*交付:正确构建的重组表达质粒,含重组质粒的DH5α菌株及测序原始报告

1-2

酵母表达菌株转化

*可提供表达菌株:X33GS115,酿酒酵母等。

*扩增培养5-10个阳性克隆并进行重组蛋白诱导表达

*SDS-PAGE交付:阳性克隆菌株及表达筛选结果报告。

2

酵母表达菌株筛选

*检测重组蛋白表达情况(适用于多拷贝数和高表达菌株)

*交付:阳性克隆菌株及表达筛选结果报告。

2

酵母表达菌株表达优化

对挑选出来的单克隆菌株,优化培养及诱导条件(培养基,菌体密度,甲醇浓度,诱导时间等),提高目标蛋白的表达量

2

小规模蛋白表达及纯化

*1L发酵液通过亲和,离子交换,疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白。

*SDS-PAGE交付:重组蛋白0.02-3mg及纯化报告。可按客户要求提供含纯化标签(Tag)或切除纯化标签(Tag)的最终蛋白,纯度>85%

2-3

大规模蛋白表达及纯化

10L30L80L,130L,500L发酵规模

 

增值服务

*通过HPLC,质谱等方法详细检测目标蛋白的质量。

*蛋白质N端测序:PPSQ31Edman降解法测序仪)

1-2

 

服务优势

--密码子优化:包含稀有密码子分析,蛋白亲水性分析和跨膜结构域的预测分析

--分泌蛋白表达,接近天然构象的重组蛋白

--多种规模蛋白发酵模式:小规模(500ml、10L)和大规模(80L、130L、250L和500L发酵罐)

--高纯度毫克级,克级重组蛋白;稳定的批间一致性

--低内毒素:LAL检测法<0.1EU/ug

--完整的GMP文件支撑体系,保证所有信息可追溯

 

如何订购?

 

 

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